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PF-8380是autotaxin抑制剂

时间:2019-06-29 00:04来源:未知 作者:admin 点击:
PF-8380还抑制大鼠自分泌运动因子,IC 50为1.16 nM,FS-3底物。当使用由与溶血磷脂酰胆碱(LPC)组合使用的胎儿成纤维细胞产生的酶作为底物时,保持PF-8380的效力。在用PF-8380孵育2小时的

  PF-8380还抑制大鼠自分泌运动因子,IC 50为1.16 nM,FS-3底物。当使用由与溶血磷脂酰胆碱(LPC)组合使用的胎儿成纤维细胞产生的酶作为底物时,保持PF-8380的效力。在用PF-8380孵育2小时的人全血中,自分泌运动因子受到抑制,IC 50为101 nM。自分泌运动因子(ATX)是一种具有溶血磷脂酶D(lysoPLD)活性的酶,催化溶血磷脂酰胆碱(LPC)产生溶血磷脂酸(LPA)。用1μMPF-8380预处理GL261和U87-MG细胞,然后进行4Gy照射,导致克隆形成存活率降低,迁移减少(GL261中33%; U87-MG中P = 0.002和17.9%; P = 0.012),减少侵袭(GL261中35.6%; U87-MG中P = 0.0037和31.8%; P = 0.002),并减弱辐射诱导的Akt磷酸化。

  PF-8380的药代动力学特征以1mg / kg的静脉内剂量和1至100mg / kg的口服剂量评估至24小时。PF-8380的平均清除率为31 mL / min / kg,稳定状态下的分布容积为3.2 L / kg,有效t 1/2为1.2 h。口服生物利用度适中,范围为43%至83%。单次口服递增剂量时血浆浓度增加,但C max以与1至10mg / kg的剂量大致成比例的速率增加,并且与10至100mg / kg的剂量成比例地增加。根据曲线暴露量与剂量大致成比例,线 mg / kg。收集后立即测量血浆C16:0,C18:0和C20:0 LPA水平。在0.5小时时3mg / kg剂量观察到LPA水平的最大降低,所有LPA在24小时时返回基线mg / kg PF-8380治疗使肿瘤相关血管分布适度增加20%(P = 0.497)。与对照组相比,在4 Gy照射前45分钟处理PF-8380与对照组相比,血管性降低了近48%(P = 0.031),与单独接受放射的小鼠相比,降低了65%P = 0.01

  将FS-3底物以500μM溶解于测定缓冲液中,并在-20℃下以一次性等分试样冷冻最多4周。重组自分泌运动因子在Tris缓冲盐水中稀释(140mM的氯化钠,5mM的KCl,1mM的氯化钙2,1毫摩尔MgCl 2,50毫摩尔Tris,pH8.0)中,并用单独的DMSO中的化合物或DMSO温育(最终1%DMSO)在37℃下保持15分钟,并且通过添加终浓度为1μM的FS-3开始反应。使反应在37℃下进行30分钟并在520nm下监测,直至未抑制的对照与无酶对照相比,得到Z≥0.5。通过使用四参数拟合确定IC 50一式三份。

  将HUVEC(1×10 6)和bEnd.3细胞(1×10 6)接种在100mm板中,24小时后,将U87-MG(2×10 6)和GL261(2×10 6)细胞接种到transwell插入。共培养24小时后,用1μMPF-8380处理细胞在用0,2,4,6或8Gy照射之前45分钟或载体对照DMSO。在与PF-8380或DMSO共培养的处理之后,计算数量的U87-MG和GL261细胞被电镀以使电镀效率正常化。培养7至10天后,将板用70%EtOH固定,并用1%亚甲蓝染色。通过在显微镜下观察平板计数由 50个细胞组成的集落。存活分数计算为(菌落数/接种细胞数)/(相应对照的菌落数/接种的细胞数)。通过曲线拟合分析生存曲线和n的α/β模型。

  雄性Lewis大鼠并使其适应环境约1周,随意提供食物和水。在研究前至少1天,用麻醉动物(起作用)并在颈动脉中植入Culex血管导管。在给药前,将动物在Culex笼中适应过夜。通过使用Culex自动血液采样器的“趋向”功能来维持颈动脉导管的通畅性。在禁食过夜后,通过口服强饲法给动物服用浓度为1,3,10,30和100 mg / kg的PF-8380。从颈动脉获得血液收集并且在施用后0.25,0.5,1,2,4,6,8和24小时由Culex自动血液采样器进行。将血液离心,收集血浆用于分析PF-8380和LPA浓度。

  GL261细胞(1×10 6)注射到裸鼠的右后肢。一旦肿瘤可触知,将小鼠蛇纹石分成6至7只动物的组,代表相似的肿瘤大小分布(范围= 240mm 3)。携带肿瘤的小鼠腹膜内注射10mg / kg的载体(DMSO)或PF-8380体重每天一次,连续五天。药物注射后45分钟,用麻醉小鼠并将其置于RS2000辐照器中。然后每天用2Gy照射它们连续5天,总共10Gy。铅块(10毫米厚)用于保护头部,胸部和腹部。使用外部可追踪数字卡尺纵向监测肿瘤大小。一旦肿瘤达到约10mm 3的体积或当溃疡变得明显时,通过颈脱位处死小鼠。

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